La serie se basa en la vida de Peter Parker, después de que se haya transformado en Spider-Man. En la serie también se desarrolla la vida amorosa con Mary Jane Watson, así como la relación de Spider-Man con la prensa y la mafia de Kingpin.
La 1.ª temporada se basa sobre todo en la presentación de villanos, como: el Lagarto en el capítulo 1 de la primera temporada, La Noche del Lagarto, en el capítulo 4 Las Travesuras de Mysterio, en el capítulo 5 El Doctor Pulpo armado y peligroso, el Doctor Octopus. Un hecho destacable es la aparición del simbionte alienígena en los capítulos 7, 8 y 9 El Disfraz del Alien que le daría a Peter Parker un traje negro, que en el en el capítulo 8 rechazaría ya que se volvía más agresivo (esto se debe a que el simbionte se alimenta de la adrenalina), y después, en el capítulo 9 se uniría a Eddie Brock formando a Venom, siendo uno de los enemigos más peligrosos que Spider-Man logró vencer…
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